KITS PARA AISLAMIENTO DE ARN TOTAL EN SANGRE

IBI Tri-Isolate (& Bacteria Lysis) Kit - Protocol

• Tamaño de la muestra: hasta 5 x 106 células cultivadas, 10 – 50 mg de tejido, hasta 200 µl de fluidos corporales (sangre, capa leucocitaria, suero, plasma), 1 x 109 células bacterianas, 20 – 50 mg de tejido vegetal
• Formato: Fenol, cloroformo isotiocianato de guanidina más sistema de columna giratoria
• Sin separación de fases de cloroformo

• Sin precipitación de ARN con isopropanol 

• Sin arrastre de fenol
• IBI Tri-Isolate es un isotiocianato de fenol y guanidina más un sistema de columna giratoria para la purificación conveniente de ARN total de alta calidad a partir de una variedad de muestras que incluyen células cultivadas, tejidos, fluidos corporales, bacterias y tejidos vegetales.
• Tiempo de operación: 15 minutos o menos
• Capacidad de unión: 50 µg de ARN de > 25 µl de agua libre de DNasa/RNasa
• Volumen de elución: 25 – 50 µl
• ARN de alta calidad: A260/A280 > 1,8, A260/A230 > 1.8
• Almacenamiento: Temperatura ambiente; Excepción: la ADNasa I y la lisozima deben almacenarse a -20 °C a su llegada
• Aplicaciones: construcción de bibliotecas de cDNA, clonación, RT-PCR (punto final), PCR en tiempo real, ensayos de protección de nucleasa, transferencia Northern

INFORMACIÓN TÉCNICA

Inicialmente, las muestras se homogeneizan en IBI Isolate Reagent sin separación de fases con cloroformo ni precipitación de ARN con isopropanol. Después de la homogeneización de la muestra, simplemente una, lave y eluya el ARN total de alta calidad en agua libre de ARNasa. El ARN purificado se puede usar en una variedad de aplicaciones posteriores, incluida la construcción de bibliotecas de ADNc, clonación, RT-PCR (punto final), PCR en tiempo real, ensayos de protección de nucleasas, transferencia Northern.

Control de calidad

IBI Tri-Isolate se prueba lote a lote. Se analizan 10 µl de un eluato de 50 µl de ARN purificado mediante electroforesis en un gel de agarosa al 0,8%.

¿Se pueden usar muestras de sangre congelada con el kit Tri-Isolate? Sí. Coloque la muestra congelada en un tubo de microcentrífuga de 1.5 ml y agregue 3 volúmenes de reactivo Tri-Isolate y deje que la muestra se descongele. Incube 5 minutos adicionales a temperatura ambiente y continúe con el resto del protocolo.

¿Se puede modificar el protocolo para adaptarse a muestras ricas en lípidos, como el tejido cerebral? Sí. Después de la homogeneización, centrifugue la muestra a 12 000 – 16 000 x g durante 2 minutos para eliminar las partículas insolubles. Después de la centrifugación de la muestra rica en grasas, una capa de grasa flotará sobre el sobrenadante. Retire y deseche la capa de grasa y transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga de 1,5 ml. Continúe con el paso #2 de unión de ARN.

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Mini Total RNA Kit (Blood & Cultured Cells) - Protocol

Mini Total RNA Kit (Blood & Cultured Cells) - SDS

• Tamaño de la muestra: 50-200 µl de sangre humana completa/hasta 5 × 106 células de mamífero cultivadas/1 × 109 células bacterianas cultivadas
• Rendimiento expectante: hasta 5-30 µg
• Tiempo de funcionamiento: 30 minutos o menos
• Volumen de elución: 50 µl

Este kit está especialmente diseñado para la purificación del ARN total de sangre humana entera fresca y células cultivadas. Este método utiliza detergentes y una sal caotrópica para lisar las células e inactivar la RNasa. El ARN en la sal caotrópica está unido por la matriz de fibra de vidrio de la columna giratoria. Una vez que se han eliminado todos los contaminantes después del paso de lavado, el ARN purificado se eluye con agua sin ARNasa. Todo el procedimiento se puede completar en 30 minutos. El ARN purificado está listo para RT-PCR, Northern Blotting, Primer Extension y construcción de bibliotecas de cDNA.

La calidad del mini kit de ARN total para sangre y células cultivadas se prueba lote a lote aislando el ARN total de muestras de sangre y células cultivadas. El ARN purificado se cuantifica con un espectrofotómetro y se comprueba mediante electroforesis.

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• Lisa los glóbulos rojos para las extracciones de ADN y ARN

Para usar con los kits de extracción de ADN genómico (sangre) de IBI y los kits de extracción de ARN total (sangre). 

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