KITS DE PLÁSMIDOS

• Tamaño de la muestra: 1 – 4 ml de cultivo bacteriano
• Rendimiento expectante: 20-30 µg para plásmidos con muchas copias/3-10 µg para plásmidos con pocas copias
• Tiempo de funcionamiento: 30 minutos o menos
• Capacidad de unión: hasta 30 µg

El kit de miniplásmidos de alta velocidad está diseñado para el aislamiento rápido de ADN plasmídico o cósmido de 1 a 5 ml de cultivos bacterianos. El método de lisis alcalina modificada y el tratamiento con ARNasa se utilizan para crear un lisado celular limpio con un mínimo de contaminantes de ARN y ADN genómico.

En presencia de una sal caotrópica, el ADN del plásmido en el lisado se une a la matriz de fibra de vidrio en la columna de centrifugado. Los contaminantes se eliminan por lavado con un tampón de lavado a base de etanol. El ADN del plásmido purificado se eluye con un Buffer de elución bajo en sal o con agua. Este procedimiento no requiere extracción de ADN con fenol o plásmido de alcohol. Los rendimientos típicos son de 20 a 30 µg para plásmidos con un número alto de copias o de 3 a 10 µg para plásmidos con un número bajo de copias. El ADN del plásmido purificado está listo para usar en reacciones de digestión, ligadura, PCR o secuenciación con enzimas de restricción. Todo el procedimiento se puede completar en menos de 30 minutos.

Control de calidad

La calidad del Mini kit de plásmido de alta velocidad se prueba lote a lote, aislando el ADN del plásmido de un cultivo de 4 ml de E. coli (DH5α) durante la noche, que contiene el plásmido p Bluescript (A600>2U/ml). Tras el proceso de purificación, se espera un rendimiento de más de 20 µg y la proporción de A260/A280 está entre 1,7 y 1,9. El plásmido purificado (1 µg) se utiliza en la digestión con EcoRI y se comprueba mediante electroforesis.

  ¿Qué kit de la competencia es comparable?

Kit de minipreparación QIAprep Spin de Qiagens & Kit de minipreparación QuickLyse de Qiagens

¿Se pueden utilizar los reactivos de QIAGEN con las columnas IBI?

Sí, cualquier cosa que esté "basada en lisis" funcionará.

¿Es necesario el uso de ampicilina u otros antibióticos durante el cultivo de E.coli para lograr un rendimiento adecuado con el kit mini plásmido IBI?

Sí, para lograr un buen rendimiento, la E.coli debe estresarse con un antibiótico.

¿Cómo puedo aumentar el rendimiento de este kit?

1. Aumente el tiempo de lisis 2. Precaliente el tampón de elución 3. Realice el paso de elución dos veces 4. Con una muestra grande/concentrada, el usuario final puede agregar tampones PD 1, 2, 3 adicionales

¿Cuál es la cantidad máxima de muestra para la columna/tubo Mini Plasmid?

La cantidad máxima de muestra para la columna/tubo es de 4 ml.

¿Cuál es la composición principal del Buffer de elución?

La composición principal del tampón es Tris-HCl pH 8.5. Este tampón no contiene EDTA. También puede usar agua pura o Buffer TE.

¿Se puede aplicar el kit de extracción de ADN plasmídico en bacterias Gram (+)?

Nuestros kits de plásmidos están diseñados principalmente para extraer ADN de plásmidos de bacterias Gram (-) como E. Coli. Las bacterias Gram (+) tienen paredes celulares más gruesas, por lo que los tampones de lisis celular proporcionados en el kit no las lisan fácilmente. Sin embargo, la extracción de ADN plasmídico de bacterias Gram (+) aún se puede lograr con un tratamiento adicional. Después de volver a suspender las células bacterianas sedimentadas en el tampón PD1, agregue lisozima para obtener una concentración final de 3 a 5 mg/ml. Incube la suspensión a 37° Celsius durante 30-60 minutos (o por un tiempo más corto cuando se usan 5 mg/ml de lisozima). Este tratamiento debilita la pared celular de las bacterias Gram (+). Agregue PD2 y siga el resto del protocolo. Para ciertas bacterias Gram (+) con paredes celulares delgadas, como Lactobacillus, la aplicación de una cantidad doble de tampón PD1, PD2 y PD3 puede ser suficiente para lisar las células. Sin embargo, aún recomendamos tratar las bacterias Gram (+) con lisozima para facilitar la lisis celular.

¿Cuál es la diferencia y/o el propósito del tampón W1 frente al tampón de lavado?

W1 contiene sal caotrópica y etanol. La sal caotrópica puede inhibir y eliminar la actividad enzimática, como la Taq polimerasa y la endonucleasa. El tampón de lavado contiene bajas concentraciones de sal y eliminará las sales y las proteínas de la muestra final.

¿Se incrementó el volumen de ARNasa A en los mini kits de plásmidos?

Sí, la cantidad de ARNasa A se duplicó el 23-9-14. La concentración se mantuvo igual: 50 mg/ml. La cantidad de ARNasa añadida al frasco de 25 ml de PD1 es ahora de 100 µl. La cantidad de ARNasa añadida al frasco de 65 ml de PD1 es de 260 µl. Esto es el doble de lo que era. Esto es para secuenciación de ADN plásmido de grado.

¿Cuál es la diferencia entre el kit de mini plásmido de alta velocidad y los kits de mini plásmido I-Blue?

Las diferencias son 2 X volumen de RNAse A y I-Blue Lysis Buffer en el I-Blue Mini. El mayor volumen de ARNasa A aumenta el rendimiento para volúmenes de muestra más grandes. Hi Speed Mini permite de 1 a 5 ml y el I-Blue Mini permite de 1 a 7 ml, lo que producirá más ADN plasmídico. Todos los demás búferes son iguales.

Comparación de kits de extracción de ADN de plásmido

Conclusiones:

1. Los kits de purificación de la marca IBI son equivalentes o superiores a la marca QIAGEN en rendimiento.

2. Los kits de purificación de la marca IBI son equivalentes a la marca QIAGEN en pureza.

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Formato centrífugo o vacío

1 – 5 ml de células bacterianas cultivadas

Placas de filtro, placas de pozos profundos y placas de recolección incluidas

El kit de plásmido de 2 x 96 pocillos se diseñó para la purificación de alto rendimiento del ADN plasmídico de 1 a 5 ml de células bacterianas cultivadas por pocillo. El kit utiliza un método de lisis alcalina modificada y un tratamiento con ARNasa para obtener un lisado de células claras con un mínimo de contaminantes de ARN y ADN genómico. Este kit requiere una centrífuga o un colector de vacío capaz de ejecutar placas de 96 pozos. IBI ofrece el colector de vacío de 96 pozos IB47500. Los rendimientos típicos son de 20 a 35 µg para plásmidos con alto número de copias y de 3 a 10 µg para plásmidos con bajo número de copias de 4 ml de células bacterianas cultivadas (E. coli). El ADN purificado está listo para su uso en reacciones de digestión, ligadura, PCR y secuenciación con enzimas de restricción.