AISLAMIENTO DE ADN/ARN VIRAL

• Tamaño de muestra: 200 µl
• Muestra: plasma, suero, líquido corporal o sobrenadante de cultivos celulares infectados por virus
• Tiempo de funcionamiento: 40 min o menos
• Volumen de elución: 50 µl

El kit de extracción de ácido nucleico viral fue diseñado específicamente para la purificación de ADN/ARN viral de muestras libres de células como: suero, plasma, fluidos corporales y el sobrenadante de cultivos de células infectadas por virus (COVID-19). Los virus de ADN/ARN se lisan de forma rápida y eficiente utilizando el tampón de lisis, que es una solución altamente concentrada de sal caotrópica. Cuando se combina con etanol, el tampón AD crea una condición óptima para la unión del ácido nucleico a la fibra de vidrio de la columna. Los contaminantes como sales, metabolitos y componentes celulares macromoleculares solubles se eliminan en el proceso de lavado. Los ácidos nucleicos se eluyen en agua libre de ARNasa y luego están listos para usar en reacciones posteriores que incluyen PCR en tiempo real, secuenciación de ADN fluorescente automatizada, PCR y otras reacciones enzimáticas. El límite de detección para ciertos virus depende de la sensibilidad de los ensayos individuales de PCR o RT-PCR.

La calidad del kit de extracción de ácido nucleico viral se prueba lote a lote aislando el ADN/ARN viral de una muestra de plasma de 200 µl.

Certificado de análisis: 

Kit de extracción de ácido nucleico viral CofA - Lote n.º FG08501-G

INFORMACIÓN TÉCNICA:

No puedo ver ningún ARN, pero sí veo ADN. ¿Es esto un problema con las concentraciones? Recuerde usar tubos de centrífuga, puntas y otras herramientas sin ARNasa, y use siempre guantes desechables durante todos los procesos de extracción. Las muestras de baja concentración pueden hacer que no se pueda ver el ARN en el gel. Para comprobar el resultado, puede realizar la “PCR de transcripción inversa”.

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• Uso en una variedad de muestras: sangre, tejidos, plantas, bacterias, hongos, virus, etc.
• Protocolo de 2 pasos de 15 minutos
• Use ADN directamente en reacciones de PCR
• No se requiere purificación de ADN.

El reactivo de ADN IBI X-Amp está diseñado para la liberación eficiente de ADN para uso directo en reacciones de PCR sin purificación. Una amplia variedad de muestras se homogeneizan de forma eficaz en el reactivo sin ningún tratamiento previo ni etapas posteriores de unión, lavado o elución. Simplemente coloque la muestra en el reactivo, siga el protocolo de 2 pasos y transfiera el lisado a una reacción PCR mix, qPCR o multiplex PCR. El reactivo de ADN X-Amp de IBI se analiza lote a lote de acuerdo con el sistema de gestión de calidad con certificación ISO de IBI. El ADN de una muestra de tejido de 1 mg se lisa en el reactivo de ADN X-Amp. Se añade una alícuota de 5 μl de lisado directamente a una mezcla de PCR de 50 μl.                                                                       X-AMP DNA Reagent- Protocol

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ViraMag Magnetic Bead Protocol

• Tamaño de la muestra: muestra de 200 µl de plasma, suero, líquido corporal (saliva) o sobrenadante de cultivos de células infectadas por virus)
• Formato: Perlas magnéticas. Fácilmente adaptable a estaciones de trabajo automatizadas de perlas magnéticas. Ver Información Técnica
• Tiempo de operación: 60 minutos
• Método de operación: Instrumento robótico de separación de perlas magnéticas o método manual
• Volumen de elución: 30 µl - 100 µl
• Sensibilidad: tan bajo como 10E1 copia del número de virus

El kit de extracción de ADN/ARN viral IBI ViraMag fue diseñado para la purificación de alto rendimiento de ADN viral o ARN viral de alta calidad a partir de muestras libres de células como suero, plasma, fluidos corporales (saliva) y sobrenadante de cultivos de células infectadas por virus (COVID-19) . El ADN/ARN viral se une a la superficie de las perlas magnéticas y se libera mediante un sistema de amortiguación patentado. El kit ViraMag Viral DNA/RNA se puede adaptar fácilmente para su uso en estaciones de trabajo e instrumentos automatizados de separación de perlas magnéticas. El ADN/ARN viral purificado se puede usar directamente en un ensayo de qPCR o RT-qPCR como la mezcla maestra IBI UniPLUS RT-qPCR (IB43150, IB43151 o IB43152).
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Consta de tubos que contienen una solución especial que conserva el ARN en la muestra viral. La muestra debe ser un hisopo o saliva.

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Solo para uso de investigación           IBI TransMedia Kit Protocol

El kit IBI TransMedia está diseñado para la estabilización, el transporte y la inactivación de muestras infecciosas sospechosas de contener ADN/ARN viral y bacteriano.

El kit IBI TransMedia consta de un tubo de almacenamiento de 6 ml con una tapa (80 mm de largo x 12,5 de diámetro) que contiene 1 ml de la solución de estabilización.

Estos componentes están destinados a:

• Inactivar virus y bacterias.
• células lisas
• Lyse membranas lipídicas
• Desnaturalizar proteínas
• Inactivar enzimas
• Estabilizar el ADN/ARN viral y bacteriano

Funciones: Eliminación de virus/bacterias | Inactivación de nucleasas | estabilización de ARN | Muestra de almacenamiento a largo plazo | Transporte a temperatura ambiente | Estabilización de cfDNA/cfRNA humano

Muestra: Hisopos nasofaríngeos | Hisopos orofaríngeos | Muestras de esputo

Medidas de seguridad:

IBI TransMedia contiene sales de guanidina que pueden formar compuestos altamente reactivos y liberar gas cianuro cuando se combinan con lejía (hipoclorito de sodio). Si el medio dividido contiene agentes potencialmente infecciosos, limpie el área afectada primero con detergente de laboratorio y agua, y luego con hipoclorito de sodio al 1% (v/v). Durante el procedimiento, use siempre una bata de laboratorio, guantes desechables y gafas protectoras.

Información técnica:

Prueba 1:

Staphylococcus aureus (Gram-positivo) se cultivaron a 0,8 de OD600. Se hizo una dilución de 10.000x, se colocó la misma cantidad de células en TransMedia y se trataron a temperatura ambiente durante 1 hora y sin tratamiento se sembraron en placas BAP y se incubaron durante 48 horas. Los resultados mostraron que las células de Staphylococcus aureus pueden eliminarse por completo con el kit IBI TransMedia.

Prueba 2:

Se cultivó Escherichia coli (gramnegativa) a 0,8 de OD600. Se hizo una dilución de 10.000x, se colocó la misma cantidad de células en TransMedia y se trataron a temperatura ambiente durante 1 hora y, sin tratamiento, se sembraron en placas LB y se incubaron durante 18 horas. Los resultados mostraron que las células de Escherichia coli pueden eliminarse por completo con el kit IBI TransMedia.

Matanza de virus:

El fago MS2 (ARN, virus icosaédrico sin envoltura) con tratamiento TransMedia y sin tratamiento se mezcló con las células y se vertió en una placa con un césped de bacterias compatibles en crecimiento activo. Después del crecimiento durante la noche, las placas se pueden visualizar, cuantificar y luego determinar el título. Los resultados mostraron que IBI TransMedia puede eliminar completamente el fago MS2.

Estabilidad del ARN:

IBI TransMedia proporciona almacenamiento a largo plazo de ARN total de E. coli. Protege eficazmente todas las especies de ARN (23S RNA, 16S, RNA, mRNA y 5S RNA/tRNA) del ataque de las nucleasas. Carril 1: ARN original. Carril 2: ARN almacenado en el IBI TransMedia durante 1 día a temperatura ambiente. Carril 3: ARN almacenado en IBI TransMedia durante 2 días a temperatura ambiente Carril 4: ARN almacenado en IBI TransMedia durante 3 días a temperatura ambiente Carril 5: ARN almacenado en IBI TransMedia durante 7 días a temperatura ambiente

Integridad del ARN:

El ARN purificado por IBI TransMedia mostró una alta calidad y una excelente integridad del ARN. Las células de E. coli se lisaron y almacenaron en IBI TransMedia durante 7 días. El ARN se purificó. Las especies de ARN se separaron en un PAGE semidesnaturalizante al 6%. Las especies de ARN se cortaron del gel, se purificaron y se confirmaron mediante hibridación de transferencia Northern usando oligosonda marcadas con P32 específicas para varias especies de ARN. También se demostraron varios ARN mediante ensayos de RT-PCR. Estos experimentos demuestran que varias especies de ARN (23S, 16S, 6S, 5S, 4.5S y 4S (ARNt) pueden protegerse del ataque de la ARNasa en IBI TransMedia. Los resultados del gel también mostraron que el ARN se mantuvo en una excelente integridad.

Compatible con kits de purificación de ácido nucleico de columna giratoria y perlas magnéticas.

Se agregaron diferentes números de copias de ácido nucleico del fago de ADN M13, fago de ARN MS2, oligo ADN sintético largo, virus de ADN de VHB, virus de ARN de VHC y ADN genómico humano en IBI TransMedia. A continuación, el ácido nucleico se purificó a partir de IBI TransMedia utilizando kits de formato de columna giratoria y perlas magnéticas de forma individual. La recuperación de ácido nucleico se determinó mediante qPCR o qRT-PCR. Los resultados mostraron que se puede recuperar un alto rendimiento de ácido nucleico (70-100 %) utilizando kits de columna giratoria y perlas magnéticas de IBI TransMedia.

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