KITS PARA AISLAMIENTO DE ARN TOTAL EN BACTERIAS
Tri-Isolate RNA Pure Kit, Marca IBI Scientific IB47630 4 Reac. | IB47631 100 Reac. & IB47632 200 Reac.
IBI Tri-Isolate (& Bacteria Lysis) Kit - Protocol
- Tamaño de la muestra: hasta 5 x 106 células cultivadas, 10 – 50 mg de tejido, hasta 200 µl de fluidos corporales (sangre, capa leucocitaria, suero, plasma), 1 x 109 células bacterianas, 20 – 50 mg de tejido vegetal
- Formato: Fenol, cloroformo isotiocianato de guanidina más sistema de columna giratoria
- Sin separación de fases de cloroformo
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Sin precipitación de ARN con isopropanol
- Sin arrastre de fenol
- IBI Tri-Isolate es un isotiocianato de fenol y guanidina más un sistema de columna giratoria para la purificación conveniente de ARN total de alta calidad a partir de una variedad de muestras que incluyen células cultivadas, tejidos, fluidos corporales, bacterias y tejidos vegetales.
- Tiempo de operación: 15 minutos o menos
- Capacidad de unión: 50 µg de ARN de > 25 µl de agua libre de DNasa/RNasa
- Volumen de elución: 25 – 50 µl
- ARN de alta calidad: A260/A280 > 1,8, A260/A230 > 1.8
- Almacenamiento: Temperatura ambiente; Excepción: la ADNasa I y la lisozima deben almacenarse a -20 °C a su llegada
- Aplicaciones: construcción de bibliotecas de cDNA, clonación, RT-PCR (punto final), PCR en tiempo real, ensayos de protección de nucleasa, transferencia Northern
INFORMACIÓN TÉCNICA
Inicialmente, las muestras se homogeneizan en IBI Isolate Reagent sin separación de fases con cloroformo ni precipitación de ARN con isopropanol. Después de la homogeneización de la muestra, simplemente una, lave y eluya el ARN total de alta calidad en agua libre de ARNasa. El ARN purificado se puede usar en una variedad de aplicaciones posteriores, incluida la construcción de bibliotecas de ADNc, clonación, RT-PCR (punto final), PCR en tiempo real, ensayos de protección de nucleasas, transferencia Northern.
Control de calidad
IBI Tri-Isolate se prueba lote a lote. Se analizan 10 µl de un eluato de 50 µl de ARN purificado mediante electroforesis en un gel de agarosa al 0,8%.
¿Se pueden usar muestras de sangre congelada con el kit Tri-Isolate? Sí. Coloque la muestra congelada en un tubo de microcentrífuga de 1.5 ml y agregue 3 volúmenes de reactivo Tri-Isolate y deje que la muestra se descongele. Incube 5 minutos adicionales a temperatura ambiente y continúe con el resto del protocolo.
¿Se puede modificar el protocolo para adaptarse a muestras ricas en lípidos, como el tejido cerebral? Sí. Después de la homogeneización, centrifugue la muestra a 12 000 – 16 000 x g durante 2 minutos para eliminar las partículas insolubles. Después de la centrifugación de la muestra rica en grasas, una capa de grasa flotará sobre el sobrenadante. Retire y deseche la capa de grasa y transfiera el sobrenadante a un nuevo tubo de centrífuga de 1,5 ml. Continúe con el paso #2 de unión de ARN.
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Precio final
Kit Transmedia, Marca IBI Scientific IB47470 10 Preps | IB47471 100 Preps & IB47472 400 Preps
Solo para uso de investigación IBI TransMedia Kit Protocol
El kit IBI TransMedia está diseñado para la estabilización, el transporte y la inactivación de muestras infecciosas sospechosas de contener ADN/ARN viral y bacteriano.
El kit IBI TransMedia consta de un tubo de almacenamiento de 6 ml con una tapa (80 mm de largo x 12,5 de diámetro) que contiene 1 ml de la solución de estabilización.
Estos componentes están destinados a:
- Inactivar virus y bacterias.
- células lisas
- Lyse membranas lipídicas
- Desnaturalizar proteínas
- Inactivar enzimas
- Estabilizar el ADN/ARN viral y bacteriano
Funciones: Eliminación de virus/bacterias | Inactivación de nucleasas | estabilización de ARN | Muestra de almacenamiento a largo plazo | Transporte a temperatura ambiente | Estabilización de cfDNA/cfRNA humano
Muestra: Hisopos nasofaríngeos | Hisopos orofaríngeos | Muestras de esputo
Medidas de seguridad:
IBI TransMedia contiene sales de guanidina que pueden formar compuestos altamente reactivos y liberar gas cianuro cuando se combinan con lejía (hipoclorito de sodio). Si el medio dividido contiene agentes potencialmente infecciosos, limpie el área afectada primero con detergente de laboratorio y agua, y luego con hipoclorito de sodio al 1% (v/v). Durante el procedimiento, use siempre una bata de laboratorio, guantes desechables y gafas protectoras.
Información técnica:
Prueba 1:
Staphylococcus aureus (Gram-positivo) se cultivaron a 0,8 de OD600. Se hizo una dilución de 10.000x, se colocó la misma cantidad de células en TransMedia y se trataron a temperatura ambiente durante 1 hora y sin tratamiento se sembraron en placas BAP y se incubaron durante 48 horas. Los resultados mostraron que las células de Staphylococcus aureus pueden eliminarse por completo con el kit IBI TransMedia.
Prueba 2:
Se cultivó Escherichia coli (gramnegativa) a 0,8 de OD600. Se hizo una dilución de 10.000x, se colocó la misma cantidad de células en TransMedia y se trataron a temperatura ambiente durante 1 hora y, sin tratamiento, se sembraron en placas LB y se incubaron durante 18 horas. Los resultados mostraron que las células de Escherichia coli pueden eliminarse por completo con el kit IBI TransMedia.
Matanza de virus:
El fago MS2 (ARN, virus icosaédrico sin envoltura) con tratamiento TransMedia y sin tratamiento se mezcló con las células y se vertió en una placa con un césped de bacterias compatibles en crecimiento activo. Después del crecimiento durante la noche, las placas se pueden visualizar, cuantificar y luego determinar el título. Los resultados mostraron que IBI TransMedia puede eliminar completamente el fago MS2.
Estabilidad del ARN:
IBI TransMedia proporciona almacenamiento a largo plazo de ARN total de E. coli. Protege eficazmente todas las especies de ARN (23S RNA, 16S, RNA, mRNA y 5S RNA/tRNA) del ataque de las nucleasas. Carril 1: ARN original. Carril 2: ARN almacenado en el IBI TransMedia durante 1 día a temperatura ambiente. Carril 3: ARN almacenado en IBI TransMedia durante 2 días a temperatura ambiente Carril 4: ARN almacenado en IBI TransMedia durante 3 días a temperatura ambiente Carril 5: ARN almacenado en IBI TransMedia durante 7 días a temperatura ambiente
Integridad del ARN:
El ARN purificado por IBI TransMedia mostró una alta calidad y una excelente integridad del ARN. Las células de E. coli se lisaron y almacenaron en IBI TransMedia durante 7 días. El ARN se purificó. Las especies de ARN se separaron en un PAGE semidesnaturalizante al 6%. Las especies de ARN se cortaron del gel, se purificaron y se confirmaron mediante hibridación de transferencia Northern usando oligosonda marcadas con P32 específicas para varias especies de ARN. También se demostraron varios ARN mediante ensayos de RT-PCR. Estos experimentos demuestran que varias especies de ARN (23S, 16S, 6S, 5S, 4.5S y 4S (ARNt) pueden protegerse del ataque de la ARNasa en IBI TransMedia. Los resultados del gel también mostraron que el ARN se mantuvo en una excelente integridad.
Compatible con kits de purificación de ácido nucleico de columna giratoria y perlas magnéticas.
Se agregaron diferentes números de copias de ácido nucleico del fago de ADN M13, fago de ARN MS2, oligo ADN sintético largo, virus de ADN de VHB, virus de ARN de VHC y ADN genómico humano en IBI TransMedia. A continuación, el ácido nucleico se purificó a partir de IBI TransMedia utilizando kits de formato de columna giratoria y perlas magnéticas de forma individual. La recuperación de ácido nucleico se determinó mediante qPCR o qRT-PCR. Los resultados mostraron que se puede recuperar un alto rendimiento de ácido nucleico (70-100 %) utilizando kits de columna giratoria y perlas magnéticas de IBI TransMedia.
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Precio final
RBAC MINI TOTAL RNA KIT, Marca IBI Scientific IB47420 4 Preps | IB47421 100 Preps & IB47422 300 Preps
rBAC Mini Total RNA Kit - Protocol
- Tamaño de la muestra: hasta 1 × 109 células bacterianas gram (+) positivas y gram (-) negativas
- Rendimiento expectante: hasta 60 µg de ARN
- Tiempo de funcionamiento: 30 minutos o menos
- Volumen de elución: 50-100 µl
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Formato: Columna giratoria
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Capacidad de unión: 50 µg
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Tipo de muestra: células bacterianas Gram (+) positivas y Gram (-) negativas
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Enzima: lisozima
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Rendimiento típico: 40-50 µg de 1 x 109 células bacterianas
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Tiempo de operación: <20 min.
Los kits rBAC Mini Total RNA se han diseñado y optimizado específicamente para purificar el ARN total de células bacterianas cultivadas grampositivas y gramnegativas. El tampón grampositivo, cuando se combina con lisozima, lisará eficazmente las paredes celulares bacterianas que consisten en peptidoglicano. Luego se usan detergentes y sal caotrópica para lisar aún más las células e inactivar la RNasa. Se pueden seguir tratamientos opcionales con ADNasa para eliminar residuos de ADN no deseados. El ARN en la sal caotrópica se une a la matriz de fibra de vidrio de la columna giratoria. Los contaminantes se eliminan con un tampón de lavado y el ARN purificado se eluye con agua libre de ARNasa. El procedimiento completo se puede completar en 30 minutos y el ARN purificado está listo para usar en RT-PCR, transferencia Northern, extensión de cebadores, selección de ARNm y síntesis de ADNc. Las columnas IBI Total RNA están empaquetadas individualmente y certificadas libres de RNasa y DNasa.
La calidad del rBAC Mini RNA Bacteria Kit se prueba lote a lote aislando el ARN deE. coli (1x109) cultivo (DO600 = 1,3, 1 ml) recogido por centrifugación a 16.000 x g durante 1 minuto. Se analizan 10 µl de un eluido de 50 µl de ARN purificado mediante electroforesis en un gel de agarosa al 0.8 %.
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Precio final
BACTERIA LYSIS KIT, Marca IBI Scientific IB47633 100 Reacciones & IB47634 200 Reacciones
IBI Bacteria Lysis Kit Protocol - (Incorporated into the IBI Tri-Isolate Kit Protocol)
- Kit complementario Tri-Isolate para extraer ARN de muestras de bacterias
- Contiene lisozima y tampón de lisis bacteriana para la lisis inicial de las paredes celulares bacterianas
El Bacteria Lysis Kit se usa con el IBI Tri-Isolate Kit cuando se extrae ARN de muestras de bacterias.
Las paredes de las células bacterianas son lisadas inicialmente por la lisozima, seguida por el tampón de lisis bacteriana. A continuación, la muestra se homogeneiza con el reactivo IBI Isolate contenido en el kit Tri-Isolate.
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Precio final